2025年蛋白分离的方法(四篇)
蛋白分离方法
文件夹
2025年蛋白分离的方法(四篇)
范文为教学中作为模范的文章，也常常用来指写作的模板。常常用于文秘写作的参考，也可以作为演讲材料编写前的参考。大家想知道怎么样才能写一篇比较优质的范文吗？这里我整理了一些优秀的范文，希望对大家有所帮助，下面我们就来了解一下吧。
蛋白分离的方法篇一
一、胶原蛋白基础知识
1、什么是胶原蛋白？
蛋白质是以氨基酸为基本单位构成的生物大分子，是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命，机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。而胶原蛋白是人体内最多的一种蛋白质，占了人体蛋白质总和的30—40%。
2、什么是胶原蛋白多肽？
胶原蛋白是大分子蛋白质，其分子量在30万以上，人体很难消化吸收。胶原蛋白多肽是分子量3000—20000左右的小分子蛋白，具有很好的生物功能性和较高的消化吸收性，吸收率可达95—100%，现在食品界所说的胶原蛋白其实都是指胶原蛋白多肽。
3、胶原蛋白对人体各部位的作用
皮肤——皮肤可分表皮、真皮及皮下组织三层，最外表为表皮，可防止外界异物入侵。由表皮外侧往内，依次是角质层、透明层、颗粒层、有棘细胞层及基底细胞层等五层细部结构，由于基底细胞层会有老旧细胞向上层顶升，大约两个星期左右到达最外层，所以角质层最后会成为污垢而剥落。皮下真皮组织的70％是胶原蛋白，皮肤有如一个大套子紧紧包住身体各处，表面积相当大，人体四肢活动时，皮肤中胶原蛋白发挥功能，使皮肤具有保护功能，又有适当弹性及坚硬度，所以胶原蛋白能够保持皮肤象20岁时的紧致、柔嫩感。表皮的基底膜与真皮中的胶原蛋白紧密结合，真皮呈现波浪状也使得表皮随之起伏。手脚能自由弯曲，跳高时具有弹性，主要归功于胶原蛋白。胶原蛋白在皮肤结构中是紧紧包住真皮层中的毛根皮脂腺以及细胞。皮肤老化后会失去弹性，主要也与胶原蛋白有关。
眼睛——角膜和结膜组织的主要成分是胶原蛋白，补充胶原蛋白能够有效预防眼部疾病。头发——头发的健康关键在于头发的基础头皮皮下组织的营养，位于真皮层胶原蛋白是表层及表皮附属物的营养供应站，表皮附属物主要是毛发与指甲，皮肤缺乏胶原蛋白，头发就会干燥分叉。另外构成头发的角蛋白与胶原蛋白结构极为相似，补充胶原蛋白能够增强发质润泽。
牙齿——牙齿主要成分之一的象牙质的18％和组成牙龈和牙根的组织成分大部分为胶原蛋白，平时口服补充胶原蛋白就能够有效预防牙龈炎等牙齿、口腔疾病。
指甲——前面已经提到位于真皮层胶原蛋白是表皮层及表皮附属物的营养供应站，指甲是表皮附属物，人体胶原蛋白流失，指甲容易断裂、晦暗无光泽。
胸部——乳房主要由结缔组织和脂肪组织构成，而挺拔丰满的乳房很大程度上依靠结缔组织的承托，胶原蛋白是结缔组织的主要成分，在结缔组织中胶原蛋白常与多糖蛋白相互交织成网状结构，产生一定的机械强度，是承托人体曲线，体现挺拔体态的物质基础。补充胶原蛋白，可以起到自然丰胸效果。
内脏器官——机体五脏六腑没有不受胶原蛋白影响的，缺乏胶原蛋白会严重影响脏器健康甚至引发各种疾病，充分补充胶原蛋白可以协助内脏器官营养补充和运动，有效预防疾病。骨骼——骨骼中有机物的70%～80%是胶原蛋白，骨骼生成时，首先必须合成充足的胶原蛋白纤维来组成骨骼的框架。因此，有人称胶原蛋白为骨骼中的骨骼。胶原蛋白的流失或缺乏会引起骨质疏松等疾病。筋腱——构成骨骼与肌肉相联的筋腱的成分80％是胶原蛋白。缺乏胶原蛋白会因起筋腱与肌肉的衰弱。因此，补钙应先补充胶原蛋白
关节——关节是骨与骨间的软骨，软骨的50％构成物质是胶原蛋白，人体由于胶原蛋白流失与缺乏而导致的关节病症情况较多。
4、胶原蛋白适用人群 ※健康人群
※亚健康人群，如易疲劳，睡眠不好，记忆力减退，未老先衰的人群
※皮肤粗糙、多斑、起皱，弹性差、光泽度下降的人群
※骨质疏松、长期补钙效果不明显，需要增加骨酪韧性的人群
※患有关节炎、关节疼痛的人群
※肠胃不好，消化系统有疾病的人群
※身材偏瘦、曲线平坦、女人味不浓的女性
※身体弱小，不够健壮的男性
※术后康复，需要补充营养的人群
二、胶原蛋白的美容作用
胶原蛋白是维持皮肤与肌肉弹性的主要成分。但随着年龄增加，皮肤与肌肉中的水分会减少这是老化的开始。此时，胶原蛋白纤维开始变为细小，弹性蛋白之弹性也会减低，原先真皮中胶原蛋白与弹性蛋白交互构成有规则的网目结构会逐渐崩解，最后导致皱纹的生成。所以补充胶原蛋白能使皮肤保持年轻，道理即在于此。在国外，对胶原蛋白在美容方面的作用已进行深入的研究。试验证明：0．01％的胶原蛋白纯溶液就有良好的抗各种辐射的作用，且能形成很好的保水层，能供给皮肤所需要的全部水分。胶原蛋白应用于美容中的功效总结起来有如下几点
1、紧肤平皱的作用：
胶原蛋白通过表皮进入真皮层组织后，能迅速填补局部塌陷，改善松弛的皮肤，收紧皮肤，减少深皱纹、平复细纹。缩小毛孔，使皮肤紧绷且富有弹性。胶原蛋白使细胞变得丰满，从而使肌肤充盈，保持肌肤弹性与润泽，维持肌肤细腻光滑，皱纹舒展，呈现质感和透明感，有效防止老化。
2、保湿滋润的作用：
胶原蛋白本身是一种由三条螺旋形肽链聚合构成的透明状物质，这三种螺旋结构能牢牢的琐住水分和营养，让皮肤时刻保持丰润、水嫩的状态。胶原蛋白中还含有羟脯氨酸和丝氨酸，是天然的保湿因子，防止水分流失，维持皮肤弹性与活力。另外，因为胶原蛋白保水性及紧缩性的双重作用，还可改善干性及油性肌肤的分泌状态，调整皮肤表面的油脂平衡，使其逐渐趋于中性肌肤，毛孔紧缩细致。
3、恢复弹性的作用：
胶原蛋白进入人体后，经过吸收，生成新生细胞与原细胞结合，填补凹陷部位，使皮肤恢复弹性、柔韧充盈。
4、修复组织的作用：
胶原蛋白进入人体后，逐渐生成新生组织与周围正常皮肤共同协调，从而起到矫形作用，恢复正常外观，同时也可减轻患者的生理痛苦。对扩大性痤疮疤痕，皮内或皮下组织受损，上皮收缩，深度皱纹或者其他软组织的缺损均有明显的改善作用。
5、美白淡斑的作用：
胶原蛋白能使细胞粘接更紧密，阻止酪氨酸转化为黑色素，不给黑色素、毒素藏身之地，令皮肤肤色白暂、色斑淡出。
6、减肥美体的作用
减肥需要燃烧脂肪（分解代谢），而胶原蛋白能使这种分解代谢过程增加和延长，燃烧更多的脂肪从而达到减肥的目的。并且胶原蛋白对细胞的修补机能会消耗大量热能，这种机能会消耗大量热能，这种机能必须在睡眠状态下进行，因此服用胶原蛋白，睡觉就能减肥，轻松减肥的梦想变成了现实。由于这种减肥方法效果温和持久（口服胶原蛋白后，熟睡无进食状态下提高脂肪燃烧率 60% 左右），对于正在减肥的人，口服胶原蛋白不仅能够加速脂肪燃烧，而且由于胶原蛋白能促进皮肤深层纤维组织的张力与弹性，使得减肥后的皮肤仍然具有弹性和光泽，防止出现皮肤松弛、下垂、脱水等常见的减肥并发症。
7、丰胸健美乳房的作用
乳房的健美对女性至关重要。丰满、坚挺的乳房不仅展示了女性的曲线形体美，更体现了女性的自信和自尊。
首先，随着年龄的增长，乳房皮肤中胶原蛋白含量不断减少，口服活性胶原蛋白在保养面部皮肤的同时，保养着全身皮肤，乳房上的皮肤也没有被遗忘。经服用胶原蛋白后，乳房上的皮肤得到养护，弹性增强、色泽改良。
第二，也是最重要的原因，补充胶原蛋白对整个乳房实体有营养保健的作用。组织学研究表明，乳房主要由结缔组织和脂肪组织构成。而结缔组织的主体就是胶原纤维组织。发育幼小的乳房补充活性胶原蛋白后，乳房则膨大隆起。老年松弛的乳房中脂肪比例大、胶原比例小、乳房则下垂、松懈。
其三，胶原纤维有绷紧乳房的作用。口服胶原蛋白的健胸作用不仅仅局限于增大乳房的体积，更重要的作用是能上提下垂的乳房及绷紧松弛的乳房。分析乳房的结构可以看到，年轻时，皮肤的致密结缔组织纤维（由胶原纤维组成）将乳腺牢固悬系和固定在皮肤上，行使着系带和“绳索”的功能，使乳房挺拔秀丽。随着岁月流失，胶原纤维三螺旋变得松懈（就象老化的松紧带一样失去拉力），不能将乳房拉紧，造成了乳房扁平下垂。而服用胶原蛋白可以纠正乳房的这种衰老退化现象。
7、消除黑眼圈和眼袋的作用
黑眼圈现象是因为人的眼睛组织较为松弛，眼袋现象则是因为眼部皮肤下垂造成的。由于该部位的皮肤薄，组织结构一旦松弛，血液就会聚积，导致黑眼圈和眼袋的发生。胶原蛋白是结缔组织的重要成分，给皮肤提供支撑力、张力，使皮肤紧实，从而改善黑眼圈和眼袋。
8、美发亮甲的作用
缺少胶原蛋白，头发会干枯分叉，胶原蛋白能营养发丝，解决头发分叉，让头发润泽有弹性。软润指甲 滋养甲面 可改变指甲黯淡无光、发黄、断裂和指甲色素沉淀等种种烦恼，胶原蛋白能使您的指甲表面不仅光滑亮丽，而且还能使指甲强韧不易断裂。
9、美洋1800鱼胶原蛋白的美容疗效 ※服用1—4周
迅速补充缺失水分，皮肤湿润度增加，皮屑减少；皮肤不再油腻、粗糙、干燥；皮肤比服用前略白，抚摸时明显感觉柔滑滋润。※服用5—8周
经过第二个月的继续修复和补充，全身皮肤都会变得水嫩亮白，色斑、皱纹、鱼尾纹、痘印、黑眼圈、眼袋等开始淡化，皮肤锁水能力加强，肌肤非常紧致，有弹性，皮肤亮白度平均提高2-6度。
※服用9——15周 三、四个月的服用过后，皮肤已轻松恢复到了年轻时的细腻、紧致，细纹、眼袋、黑斑、痘印、暗疮基本消失，指甲表面也变的光滑亮丽，头发柔顺有光泽，整个人气色大变，精神矍铄、神采奕奕！
※服用16—22周
前期的效果将得到综合巩固和提升，皮肤抵抗外界刺激的能力和自我恢复能力显著加强，皮肤如新生婴儿般一尘不染，红润有光泽，娇柔动人，指甲也富有弹性和韧性，乳房丰满，骨骼强硬，走路腿脚有力。全身由内而外，从根本上彻底恢复到年轻时的状态，魅力、自信、年轻的女人非你莫属！
三、胶原蛋白的健康作用
胶原蛋白是由成纤维细胞合成的，但随着人的年龄增长，以及自由基的大量产生，胶原蛋白结构也在发生变化并渐渐流失（正常人体每年会流失1%的胶原蛋白），导致体内的胶原蛋白含量和种类发生劣化。与此同时，成纤维细胞的合成能力下降，胶原蛋白的降解却加快，直接导致可溶性胶原蛋白逐渐减少，细胞间具有很好储水性的粘多糖也减少，结缔组织弹性低下，皮肤就会失去弹性并变薄、老化。不仅仅如此，导致真皮的纤维断裂、脂肪萎缩、汗腺及皮脂腺分泌减少，使皮肤变得干燥、皱纹增多、出现色斑等，这些现象都是“衰老”的表现！这种衰老现象不断地随着年龄的增长而加剧，直观地表现为：
※ 面部出现皱纹和老人斑。※ 皮肤发暗和失去光泽。※ 皮肤粗糙和弹性变差。※ 动脉血管硬化。
※ 眼球晶体出现老年性白内障、角膜透明度减小。※ 胳膊腿不灵活甚至关节疼痛等现象。
而胶原蛋白在人体的皮肤、骨质、肌腱以及其他结缔组织中参与细胞的迁移、分化和增殖，具有有很强的生物活性和生物功能，是新陈代谢的促进剂，促进人体内胶原蛋白的合成，减缓生物组织衰老和功能减退。因此，胶原蛋白对于老年人、更年期妇女、运动过度者、骨折者或关节容易酸痛者提高生命健康质量尤为重要。
1、胶原蛋白和补钙的关系
随着医学科学的进步，人们对于补钙的认识也不断深化。五六十年代医学上提倡补钙；七八十年代认识到维生素d3利于钙的吸收，提倡晒太阳和补充d3；现在才明白，人体主要不是缺钙而是特别需要补充胶原蛋白来吸附和固定钙。
人体内的钙，主要存储在骨骼和牙齿里，少部分在血浆中（常说的血钙）。骨钙与血钙处于互相调节的过程中。食物里的钙经消化由肠道吸收进入血液，血浆里的蛋白质（起作用的主要是基中的羟脯氨酸）把钙运送到去由成骨细胞矿化后形成骨质、牙齿等组织。血浆里的钙浓度过低的话，骨钙会溶解出来补充到血液里。一般来说，血液中羟脯氨酸的含量是吸收钙的一个重要指标。胶原蛋白中含有其它蛋白质无法比较的丰富的羟脯氨酸和羟赖氨酸，而羟脯氨酸不仅仅是将血浆中的钙运送到骨细胞的运载工具，骨组织中的骨胶原羟基磷钙的黏合剂，骨质就是羟基磷酸钙与骨胶原的结合体。由此，我们明白一个道理：补钙，应该是胶原蛋白的补充在先，其次才是钙质的补充。只要人体能够摄入足够的胶原蛋白，并且胶原蛋白的代谢功能是正常的，就不必特意额外地摄取钙。
2、胶原蛋白的降血糖作用
胶原蛋白中含有胶原蛋白多肽-铬，小白鼠动物实验发现胶原蛋白多肽 – 铬（iii）螯合物对于糖尿病空腹血糖的降低、增加肝糖原的合成及葡萄糖激酶的活性、控制甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，提高高密度脂蛋白胆固醇水平有明显的作用。结果表明这种胶原多肽-----铬有降血糖、降血脂及抗应激的保健功能
3、胶原蛋白的降压作用
三大现代疾病：肥胖、高血压和血液中高甘油三酯、高胆固醇，严重威胁人类生活质量。胶原蛋白中还有一定量的骨胶原九肽，九肽可以抑制造成高血压的血管紧张素转化酶（ace）活性，动物实验也证明了它显著降低高血压大鼠的动脉血压。食物中的胶原蛋白在体内消化过程中，也有可能会水解出这样的九肽，具有抑制血管紧张素转换酶活性的作用，可降低血甘油三脂和胆固醇，从而降低血压。胶原蛋白还对血管内皮细胞具有明显的促进增殖作用，即对血管损伤有一定的保护和修复作用。因此，有利于降低体重和血脂，适用于超重病人和动脉硬化的病人。
4、胶原蛋白抑制癌细胞的作用
癌细胞的增殖和转移是两种不同的表现形式。
首先是癌细胞的增殖，癌肿瘤是一个充满毛细血管的血包，癌细胞为了获取大量的营养成分，就要疯狂地分泌出血管形成因子taf来使毛细血管急速增加，因为毛细血管是癌细胞获取营养成分的通道。
其次是癌细胞的转移。当癌细胞要转移到别的脏器时，首先要往该器官深处移动，以获得更好的发展环境。任何器官表面都有胶原蛋白构成的基底膜保护着。所以癌细胞就必须要穿透该处的胶原蛋白构成的基底膜组织进入该器官，并且必须到达有血管的部位。然后，癌细胞再进一步穿透血管（血管的中间层就是胶原蛋白构成的），进入该血管并随着血管内血液循环，以便快速移动扩散到其他部位。
事物总是矛盾的，癌细胞要增殖和转移，机体内就有抑制癌细胞增殖和控制癌细胞转移的机制。
首先，每个单独的细胞外面被细胞外基质（主要是胶原蛋白）包裹着，细胞与细胞之间的连接也是靠细胞外基质粘连起来的，细胞外基质在肿瘤形成中起着关键的作用。因为癌肿瘤的表面被胶原纤维包裹着，胶原纤维的作用之一就是抑制癌细胞的生长和转移。任何健康的人每天都有至少数以千计的癌细胞产生，甚至许多人至死都是癌肿瘤携带者。为什么有人发病成为癌症患者，而有些人就没有呢?有的癌患者就可以控制住癌细胞的增殖和转移，而有的患者就控制不住。实际上，包裹在癌细胞外侧的胶原蛋白就是“防卫军”，无时无刻地与癌细胞在进行卓绝的“攻守之战”。身体有足够的胶原蛋白的话，胶原纤维就会把癌细胞紧紧地包裹，使其不能任意增殖扩散。当人体缺乏胶原蛋白的时候，癌细胞突破这一防线就开始肆虐增殖和转移。
另外，当人体的免疫蛋白与胶原蛋白结合，巨噬细胞、淋巴细胞、血浆细胞及免疫球蛋白等免疫机能就会总体性提高，可以吞噬癌细胞。
胶原纤维还能约束息肉增生和良性瘤的扩大。尤其当患有这些疾病的时候，由于身体需要大量的胶原蛋白，而人体自我合成速度又不足以满足身体需要的话，就必须通过食物补充胶原蛋白。通过食物还不能有效补充胶原蛋白的话，身体就只好“东拆西借”----分解身体其它部位的胶原组织向病灶供给。所以，我们常常看到末期癌症患者身体消瘦、骨架缩小就是这个缘故。
尤其，癌症患者接受的化疗、放疗、电疗等疗法，在消灭癌细胞的同时，敌我不分地将包裹在肿瘤外层的胶原纤维也分解摧毁了。而肿瘤一旦暴露后，失去胶原纤维的束缚，更加加速了癌细胞的扩散速度。因此，癌症患者更需要补充胶原蛋白加强辅助治疗
5、胶原蛋白与免疫机能
人体的免疫力的高低因人而异，原因很多。但是，基本原因是免疫球蛋白、淋巴球与巨噬细胞等免疫细胞在发现外来异物侵入机体时，会将异物包围吞噬，甚至自我牺牲以保护身体。所以，免疫细胞越多越强壮，身体免疫力越高。
研究表明，胶原蛋白与免疫蛋白相结合就可以有效地增强人体免疫系统的免疫力。
当免疫细胞随血液流经身体各处时，会透过血管壁，接近外来的异物（如细菌、病毒等），若这一部位胶原蛋白含量丰富的话，免疫细胞就与胶原蛋白有机结合起来，共同对抗入侵异物。这一生物活动一旦发生，身体就像接到全体总动员令一样，一连串的免疫机能都被激活，巨噬细胞、淋巴球、血浆细胞及免疫球蛋白等免疫机能就会提高，人体抵抗力也就增强了。
6、胶原蛋白与儿童和青少年发育
影响儿童和青少年发育的因素，除了遗传因素（占40~50%），营养因素是最重要的。营养因素中，蛋白质的影响最为直接。过去，日本人的身高不如中国人，而最新的统计结果，我国7岁男女儿童的平均身高分别比日本同龄儿童低0.6厘米和0.5厘米，15~18岁男女青少年分别平均比日本同龄者矮1.4厘米和0.6厘米。拔除掉遗传因素外，无疑与营养素摄入多少有直接关系。
人体中的矿物质约占体重的5%，其中的钙约占体重的2%。钙的总量的99%。分页在骨骼和牙齿中，其余1%分页在血液、细胞间液及软组织中。人在20岁之前是骨骼的生长阶段，有两个生长高峰期：第一个高峰1岁以前，如果发育迟缓就会出牙晚、学步晚、鸡胸。第二个高峰是12~14岁，如果发育迟缓就会身材矮小、生长痛等。
动物实验发现，给幼马饮料中添加胶原蛋白，通过对关节间隙的测定结果表明，与对照组相比较，幼马的软骨生长茁壮、鬃毛稠密，体高47%，马蹄生长37%。这说明，生物体发育期对于骨质发育的需求。胶原蛋白是治疗缺钙症的激活剂，对弥补动物的幼年期、青春期对于缺钙以及骨量需要有显著的疗效。人的发声器官主要是由喉头、喉结和甲状软骨组成，这些器官又是有弹性蛋白质薄膜构成，变声期的青少年保护好发声器官的发育非常重要，尤其是喜欢声乐的艺术少年，特别要注意在变声期多吃富含胶原蛋白的食物和摄取胶原蛋白。小贴士
自制胶原蛋白面膜
使用胶原蛋白粉最好是“食用+外敷”，而且最好是选用纯的（无复配物的）、鱼的胶原蛋白，原因是鱼胶原更接近人体胶原，并且鱼的活化温度低10℃左右，更适合做面膜！1个月就会感觉毛孔明显收紧，而且脸上还很光滑，皮肤也比没有吃以前更嫩一些！第一步：准备调制胶原蛋白面膜的小碗和面膜纸。第二步：先将一袋胶原蛋白粉倒入小碗中。
第三步：放入适量的水（牛奶也可），胶原蛋白粉正在主动溶解。
第四步：把面膜纸折叠一下放入小碗中，轻轻地压一下，让面膜纸完全浸湿即可。
第五步：静置5-10分钟，胶原蛋白粉已经主动溶于水中。
第六步：拿起面膜纸敷于脸部，用剩下的胶原蛋白粉溶液轻拍脸部，让面膜纸紧贴面部，过10-15分钟取下面膜纸即可。
注：也可将胶原蛋白溶液直接刷在脸上，再将面膜纸浸湿敷脸。
蛋白分离的方法篇二
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离、鉴定(杜青 胡弘毅)
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离、鉴定
杜青 胡弘毅
（化学与分子科学学院；湖北 武汉 430072）
摘要：本文介绍了从牛奶中分离酪蛋白和乳糖的方法，和鉴定酪蛋白的方法。关键词：酪蛋白、乳糖、等电点、分离
1.引言
牛奶是营养最完备的食品之一，这一点已为许多人认识并接受。尤其是在婴儿及青少年时期，每天一定量的牛奶能促进身体健康成长。牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质，这些都是人体发育所必不可少的物质。
牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白。酪蛋白是含磷蛋白质的复杂混合物，在牛奶中以其钙盐形式存在，即酪蛋白钙。利用蛋白质在等电点时溶解度最小的特性，把牛奶的ｐｈ值调到酪蛋白的等电点(ｐｈ =4.8)来沉淀分离酪蛋白。酷蛋白不溶于乙醇和乙醚，所以可用乙醇和乙醚将其中的脂肪洗涤除去。
牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖。它是唯一由哺乳动物乳糖合成的糖，它是在乳腺中被合成的。乳糖是成长中的婴儿建立其发育中的脑子和神经组织所需的物质。乳糖也是不溶于乙醇的，所以，当
2.材料与方法
2.1 实验仪器
恒温水浴锅、抽气抽滤瓶、布氏漏斗、蒸发皿、烧杯600ml、100ml各一个、表面皿、天平、玻璃棒。
2.2 主要试剂
10%醋酸溶液、95%乙醇、乙醚、伊利牌纯牛奶、精密ph试纸（ph=3~5）、碳酸钙、滤纸、1%cuso4溶液、10%naoh溶液、茚三酮溶液。
2.3 实验过程
2.3.1 酪蛋白的分离
取三份20ml新鲜牛奶于100ml烧杯中，在恒温水浴中加热至45℃，边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液，通过ph试纸测量至牛奶ph分别为4.8、4.6和3.8。放置冷却、澄清后，抽滤。注意先将上层清液滤出，再将沉淀倾入漏斗中。（滤完后，在滤液中加入少量粉状碳酸钙留作乳糖的分离。）再依次用95%乙醇、乙醇乙醚等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白。用乙醚洗涤时，注意用玻璃棒捣碎成团的固体，并反复翻洗，保证脂肪被洗净。将洗净的酪蛋白移至表面皿上，自然晾干后称重。
2.3.2 酪蛋白的鉴定（在酪蛋白分离后立即完成效果最好）
取少量酪蛋白颗粒于试管中，加入少量水溶解。
取10ml酪蛋白溶液，加入茚三酮溶液5滴，振荡，放入沸水浴中加热2分钟，溶液呈淡紫色。（茚三酮反应）
取10ml酪蛋白溶液，加入10% naoh溶液2ml后，滴入1%cuso4溶液1ml。振荡试管，溶液呈蓝紫色。（缩二脲反应）
取10ml酪蛋白溶液，加入浓硝酸2ml后加热，有黄色沉淀生成。再加入10%naoh溶液2ml，沉淀为橘黄色。（蛋黄颜色反应）
2.3.3 乳糖的分离
将2.3.1中滤液用倾滗法倒至蒸发皿中，用蒸汽浴浓缩至5ml后，将热的混合物用布氏漏斗抽滤，除去沉淀的蛋白质和残余碳酸钙。加热滤液，在热的溶液中加入95%乙醇18
ｍl，并继续加热，待其混合均匀后，趁热过滤，滤液应澄清。把滤液移至锥形瓶中，加塞，放置 1-2天，让乳糖充分结晶。抽滤，分离出乳糖晶体，并用冷的95%的乙醇水溶液洗涤产物，待其干燥后称重。
3．结果与讨论
3.1不同ph值的酪蛋白的实验现象
ph值调到3.8的牛奶,酪蛋白迅速沉淀下来，抽滤的速度也很快，鉴定酪蛋白的几个性质试验现象都十分明显，而且滤液十分澄清，但滤液中只析出微量絮状乳糖。可能是酸的浓度太大，乳糖被大量水解。
ph值调到4.8的牛奶，酪蛋白的沉淀速度很慢，抽滤的速度也很慢，而且抽不干，滤液是浑浊的。
ph值调到4.6的牛奶，酪蛋白沉淀速度和抽滤速度处于上面两种情况的中间，得到3.1g 酪蛋白，性质试验现象明显。滤液略显乳白色，得0.23g乳糖，乳糖呈片状晶体。
3.2奶中脂肪的影响
脂肪也是牛奶的主要成分之一，约占牛奶的3.9%,在分离酪蛋白时，脂肪回夹杂在酪蛋白中一起沉淀出来。因此，在用乙醚洗涤酪蛋白时，应把任何形状的酪蛋白捣碎，并用玻璃棒搅拌约10min，尽可能出去脂肪。否则，酪蛋白长时间放置后会焦化变黄。
3.3碳酸钙的作用
本实验中所使用的碳酸钙，主要是用以中和过剩的乙酸，避免在后面的实验中乳糖在酸性条件下水解，从而影响收得率。
乙醇混入水溶液中时,乳糖会结晶出来 ,从而达到
…¿报名分离的目的。
蛋白分离的方法篇三
大豆分离蛋白的主要技术性能指标 水份：≤6% 干基粗蛋白：≥90% 水溶氮指数：≥60% tpc：≤10000个 大肠杆菌：0个 色泽：浅黄/乳白
气滋味：具有分离蛋白特有的气滋味 ph值：6.8～7.2 密度：过200目筛95%，过270目筛 90% 产品的功能特性将根据不同应用领域来确认
乳化型：通过1（蛋白）：4（水）：4（脂肪）的测试，肠体光亮、有弹性，无油、水渗出。
高凝胶型：通过1（蛋白）：5（水）：2（脂肪）的测试，肠体光洁度好，有弹性，无油、水渗出。
高分散（注射）型：1:10(蛋白:水)试验：稍搅拌溶解，静置三分钟无分层，0.5mm注射针头完全通过。大豆分离蛋白工艺流程
低温豆粕——萃取——分离——酸沉——分离——水洗——分离——中和——杀菌——闪蒸——干燥——超细粉碎——混合造粒——喷涂——筛选——金属检测——包装 工艺简要描述：
萃取：将大豆低温豆粕置入萃取罐中按1：9的比例加入9倍的水，水温控制为40c0，加入碱使溶液在ph为9的条件下低温豆粕豆粕中的蛋白溶解于水中。
分离：将低温豆粕溶液送入高速分离机，将混合溶液中的粗纤维（豆渣）与含有蛋白的水（混合豆乳）分离开。豆渣排到室外准备作饲料销售。混合豆乳回收置入酸沉罐中。
酸沉：利用大豆蛋白等电点为4.2的原理，加入酸调整酸沉罐中混合豆乳的ph到4.2左右。使蛋白在这个条件下产生沉淀。
分离：将酸沉后的混合豆乳送入分离机进行分离，使沉淀的蛋白颗粒与水分离。水（豆清水）排入废水处理场治理后达标排放。回收蛋白液（凝乳）到暂存罐。
水洗：按1（凝乳）：4的比例加水入暂存罐中搅拌。使凝乳中的盐份和灰份溶解于水中。
分离：将暂存罐中的凝乳液送入离心机进行分离。水排入废水处理场治理达标排放，凝乳回收入中和罐。
中和：加入碱入中和罐，使凝乳的ph调整到7。杀菌：将中和后的凝乳利用140c0的高温进行瞬时杀菌 干燥：将杀菌后的溶解送入干燥塔，在干燥温度为180c0的条件下将溶解干燥。
筛选：对干燥的大豆分离蛋白进行初步筛选。使98%通过100目标准筛。
超微粉碎：用特殊超微粉碎机对产品进行粉碎，使90%通过200目标准筛造粒：产品随后进行造粒设备进行造粒，使产品粒度均匀。
筛选：对产品进行进一步筛选。
喷涂：在产品表面喷涂表面活性剂，提高产品乳化稳定效果。金属检测：对产品进行金属检测。
包装：检测后的产品进行自动包装系统，按规定的重量进行包装。
蛋白分离的方法篇四
浅述蛋白质分离纯化的新技术
摘 要： 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术，综和近年来国内外的一些研究结果，结合实际应用的例子，分析了各种分离纯化方法的优点，同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。生物技术的发展非常迅速，基因工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术，已经能设计、制造、生产人们急需的多种蛋白质。和其它生物产品的生产过程一样蛋白质的生产过程一般也分为上、中、下游过程。上、中游过程是运用生物技术生产目标产物，下游过程是指对含有目标产物的物料进行处理、分离、纯化、加工目标产物。本文主要综和近年来国内外的研究结果，介绍了蛋白质的最新分离纯化技术。
2.蛋白质的分离纯化方法： 2.1 浊点萃取法(cpe)： 2.1.1 概念及原理：
浊点萃取法(cloud point extraction，cpe)〔1〕是近年来出现的一种新兴的液—液萃取技术，它不使用挥发性有机溶剂，不影响环境。它以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，改变实验参数引发相分离，将疏水性物质与亲水性物质分离。目前该法已成功地应用于金属螯合物、生物大分子的分离与纯化及环境样品的前处理中[2-5]。cpe 法除了利用增溶作用外，还利用了表面活性剂另一个重要性质——浊点现象。溶液静置一段时间(或离心)后会形成两个透明的液相：一为表面活性剂相(约占总体积的5％)；另一为水相(胶束浓度等于cmc)。外界条件(如温度)向相反方向变化，两相便消失，再次成为均一溶液。溶解在溶液中的疏水性物质如膜蛋白，与表面活性剂的疏水基团结合，被萃取进表面活性剂相，亲水性物质留在水相，这种利用浊点现象使样品中疏水性物质与亲水性物质分离的萃取方法就是浊点萃取。图1显示了由温度变化引发的这种相分离现象。温度的改变，引起水化层的破坏，增强了表面活性剂的疏水性。2.1.2 蛋白质分离纯化中的应用：
cpe 法可用于分离膜蛋白、酶、动物、植物和细菌的受体，还可以替代一些分离方法如硫酸铵分级法作为纯化蛋白的第一步，与色谱方法联用。另外，cpe 法分离纯化蛋白质已经可以实现大规模操作。minuth等人成功地进行了胆固醇氧化酶浊点萃取的中试研究。虽然使用离心分离器可以使cpe大规模连续进行，但商品离心分离器用于cpe 的效率和容量仍需进一步研究。而且，他们发现相分离操作受细胞培养时产生的表面活性物质影响较大，体系两相间密度差较小，表面张力较小，含产物的表面活性剂相的流变学行为较复杂，操作较难。表1列出了cpe法近几年来在蛋白质分离纯化中的应用。(1)cpe法用于分离纯化膜蛋白膜蛋白(内嵌膜蛋白、外围膜蛋白)硫水性强、难溶于水，抽提内嵌膜蛋白时，既要削弱它与膜脂的硫水性结合，又耍使它保持硫水基在外的天然状态，较难分离纯化。由于表面活性刑具有两亲性，它一直作为腹蛋白理想的增溶剂。增溶时，膜蛋白琉水部分嵌入胶束的硫水核中而与膜脱离，又保持了膜蛋白表面的废水结构。相分离后，膜蛋白与表面活性剂共同析出，与亲水性蛋白质分离。所以，cpe 法在分离纯化膜蛋白方面极有优势。
(2)与其它分析技术的联用
cpe 可以作为高效液相色谱(hplc)、流动注射分析(fia)、毛细管电泳(ce)等仪器分析的样品前处理方法，提高检出灵敏度。表面活性别可以防止样品吸附在玻璃容器上，易于与fia中的载液及hplc中的有机流动相或胶束流动相混合，可以直接进样。但是在很多应用中需要除去表面活性剂后再与仪器联用。将萃取物与表面活性剂分离的方法很多。对于cmc＞1mm 的表面活性剂如两性离子表面活性剂可用透析法，但操作时间较长(24h左右)。对于cmc 较小的表面活性剂可通过色谱柱分离除去，如凝胶柱、毛纫管柱等，分离出的表面活性剂可以再利用，也可以作焚烧处理。但cpe作为hplc 的样品前处理方法有两个缺点：第一，常用的表面活性剂在uv区域有很强的背景吸收。第二，操作时间较长，从色谱柱上需用几个小时洗脱表面活性剂。表面活性剂的洗脱可能会干扰分析物的测定[3]。
2.2 置换色谱法：
2.2.1 概念及分离机理：置换色谱(displacement chromatography)〔6〕作为一种非线性色谱技术，是指样品输入色谱柱后，用一种与固定相作用力极强的置换剂(displacer)通人色谱柱，去替代结合在固定相表面的溶质分子。样品在置换剂的推动下沿色谱柱前进，使样品中各组分按作用力强弱的次序，形成一系列前后相邻的谱带，并在置换剂的推动下流出色谱柱[7]。置换色谱的分离行为与样品组分和置换剂在实验条件下的吸附等湿线有直接的联系。置换色谱要求样品组分及置换剂的吸附等湿线应为langmuir 型，而且置换剂相对于被分离的各组分应有最强的吸附能力，其吸附等温线位于所有组分的吸附等温线的上方[7]，见图1(a)。根据物料平衡方程，置换剂在柱中的移动速度ud有下列关系：
式中ud 为流动相的线速，ф为相比，qd 和cd 分别为置换剂在固定相和流动相中的浓度，qd／cd 是直线od的斜率，称之为操作线(operating line)。当操作线的斜率小于被分离组分等温线的起始斜率，样品才能进行置换展开，最终形成如图l(中的置换序列，这是在理想的情况下(假定无轴向扩散及二次化学平衡)获得的置换色谱图。每一组分形成矩形的平台(plateau)洗脱峰，相邻各组分的平台洗脱峰组成了一个台阶
状的色谱图。此时，样品中不同的组分以置换剂的速度前进，即达到等速状态(isobathic conditions)：
ud＝u2； u3＝u4式中u2、u3、u4 指被置换的三组分的速度
2.2.2 影响置换色谱分离的因素：
（1）置换剂
置换剂的选择是置换色谱能否成功地分离和纯化目标产物的关键因素之一〔7,8〕。对于蛋白质生物大分子的置换色谱来说，多离子型的置换剂与离子交换续料相结合是目前常用的分离方式。传统观点认为分子量相对大的聚电解质是较合适的置换剂，因为它们对固定相的结合比分离物更强，如羧甲基葡聚糖(cmd)、硫酸葡聚糖、羧甲基淀粉(cms)〔9〕、硫酸鱼精蛋、肝素、多硫酸戊聚糖(pps)等。近期的研究表明，低分子量的化合物作为置换剂则更有优势，因为即使置换剂与蛋白质产物的峰有叠加，在后处理过程中，低分子量置换剂则较容易从目标产物中分离；同时，合成低分子量置换剂成本较低，色谱柱再生过程也比分子量大的置换剂快。
（2）固定相
理想的固定相应具备以下条件：样品及置换剂在固定相上应有较强的吸附作用，且吸附是可逆的；样品及置换剂在固定相上的吸附等温线应为langmuir 型；样品各组分在固定相上的吸附能力应有较大差别，以保证置换色谱带的交叠部分尽可能小而获得良好的产率；有较好的化学稳定性，可适用于不同ph 值的缓冲液和有机溶剂；有较大的比表面及吸附容量；有较好的机械强度，而且容易再生。置换色谱中的环境不同，置换效果也不一样，即使是选用同样的硅胶，由于来源和制备方法上的差异也会影响置换效率。反相
色谱中使用的烷基硅胶柱常被应用于置换色谱。同其它硅胶固定相相比，烷基硅胶柱由于柱容量低及非选择性吸附等缺点，很少被用于洗脱色谱，但它却可以用于置换色诺，并成功地分离了对映异构体。
1、问题：电渗纯化蛋白质，结果几乎没得到蛋白，请问哪位有高见 今夜纯化蛋白，本以为唾手可得，结果却大失所望....我用sds-page分离，kcl显带，割胶，而后电渗分离，测od 值极低，请问哪位有这方面的经验或其它方法，望赐教。解决：多挖点胶，收集起来，放在1.5 离心管里，用pbs捣烂，4度 过夜。然后离心，收集上清即可。最后，把上清冻成干粉。
3、问题：蛋白质纯化，装柱，过柱应注意事项有哪些？（dahuaidang）
现在要进行蛋白质纯化，有关装柱和过柱的注意事项有哪些呀？还有，需要测序的蛋白质样品，大概需要多少，样品要求有哪些。柱子sephadex-200,和deae-纤维互素。
第一，手工装柱一般只适宜于大量蛋白质的提取。分子筛柱一般在盐析以后用效率才高，因为它的分媛实汀ｒ话阄叶荚蕹捎茫龋校蹋弥颍疲校蹋弥?gelfitration column).如果手工装柱，长度应是内径的６０－８０倍，一般柱长应在1.2-2米，对于软胶，走一次柱须１２小时以上，对硬胶，也需５－６小时。
第二，仪器检测器灵敏度调整：最重要的是确定仪器工作正常，信号相应正常。可用在检测器出口通气泡和检测器入口注射有色样品的方法确认仪器正常和估计灵敏度。
第三，均匀, 无气泡，平衡充分，分子筛要注意长度与直径比。测序的蛋白量' 我用的方法的量是sds-page 第四，如果是测序的话,跑sds-page,把染出的蛋白质带,挖下来.,直接拿去做质谱,只要你有钱国家生物医学分析中心。还有就是要保证挖的是一个蛋白质带,不能含杂蛋白质的,不然,把杂蛋白质测了怎么办。
第五，测序跟质谱不是一回事儿的。做质谱可以做分子量和质谱图，但是未必是序列。序列是要单测的。北大有位老师可以做：180块钱一个氨基酸。做质谱多得是：测分子量大约是450块钱了，测图谱的要一千多块。
4、问题：跑sds-page 有好多带，而过柱时却没有峰，原因是什么？
1、会不会是洗脱太快。
2、查查有没有断层。
3、sds-page 分离能力强, 而在柱子fraction 中几个低峰依次串在一起就不明显了。
4、上柱前样品要浓缩，保证样浓度不能太低。如没浓缩，检测仪的量程又没选好，可能看不出来。
5、sephadex 是amersham 公司经典的层析填料，有很高的选择性，不同颗粒大小的填料有不同的分离范围，主要用于凝胶层析（亦称分子筛）。粗颗粒流速较快，细颗粒流速较慢，但分辨率较高。sephadex 200的分离范围（以球蛋白计）是5－60kda。这种填料的另一个优点是较便宜。（也够贵的）现已被新一代bioprocess填料代替。deae--纤维素是用于离子交换。这是一种弱阴离子填料。
1、如果是离子交换，上样浓度太大反而不好，这样子动态载量会减小；
2、如果是凝胶层析，上样浓度要尽量大些，道理和电泳一样，样品在跑的过程中不可避免地会被稀释，变得“broad”，杂质和目标蛋白的洗脱峰就有更多的部分重叠，影响纯度。
3、关于凝胶层析的上样量，通常是柱体积的2－5％，太多会影响分离效果。你的上样量显然太大了。在现有条件下，可以通过连续批次上样，即不等前次样品跑出柱子，就第二次上样，通常可以做到一个柱体积上两次样，这样子可以节省时间和试剂。但要具体摸索。
4、至于量程的设定，我建议先用缓冲液回零，再用注射器或泵将样品注入检测器，调至满刻度，应该差不多了。
5、edta 是常用的生物缓冲液的成分之一，它在某些情况下会影响层析，具体情况具体分析。
6、什么叫连续批次上样？具体我应该怎么fumble呀，我还从没听说过这个词呢。还望指教。
一般情况下，上柱的样品跑出柱子后，根据紫外或电导或其他检测器的情况分部收集完成后，才开始第二次上样，需要用至少一个柱体积的缓冲液。这种情况下，绝大部分缓冲液是用于将样品“冲”出柱子，尤其是后半部分的缓冲液。有些浪费。这部分缓冲液的完全可以再上一次样品，适当地调节两次上样的间隔，可以做到两次样品完全分开而不会重叠，从而一个柱体积的洗脱中可以两次上样，节省试剂，缩短时间，即所谓“连续批次”。这是相对通常情况下而言的。
7、例子：样品是用10mmtris-cl,ph7.4(含10mmedta),而流洗缓冲是30mmtris-cl,ph7.9,我自己认为这样应该不会有太大影响吧，希望有知情者告知。好让我下次改正。
分析：根据你的描述，看来你是在用sephadex 26/100做凝胶层析。
1、凝胶层析主要用途有两个，一个是在其分辨率范围内根据分子大小进行分离，常用于蛋白质纯化的最后一步，即精细纯化（polishing），由于样品体积明显影响分离速度和分辨率，故很少用于粗提纯。另一个用途是脱盐/缓冲液置换，即将蛋白或其他大分子量的组分与无机盐等小分子组分分开。常用于不同层析步骤之间的缓冲液置换，使得样品与待使用的缓冲液成分尽量一致。目前amersham公司的填料中sephadex g25较常用于这方面。
2、如果你的凝胶柱子用于蛋白质的分离纯化，如我前所提，分辨率至关重要。装柱的效果直接影响分离效果。装得不好的柱子是对填料的浪费，尤其是用好的凝胶。不知道你是否测过这个柱子的柱效？合格的sephadex g100柱子的每米理论塔板数应在3000－6000之间。如果低于3000，最好重装。
3、平衡也很重要。柱子装完后，要用和上样缓冲液尽量相同的缓冲液平衡，流速也与上样尽量一致，平衡至少5 个柱体积，让填料“喝饱”，即流出的液体和进的液体成分尽量一致，有时紫外检测器的走线平稳并不一定意味着平衡完成即是如此。连续上样过程中，也要适当进行平衡，比如3－5 次上样后平衡2个柱体积，对柱子的分离效果和寿命都有好处。
8、问题：823a型紫外检测仪——3057型便携式记录仪。我不明白这种组装是啥道理？是通过什么信号使得记录仪能够记录到，由检测器检测出的信息。所以我在操作时，不知道怎么调节。那些按钮之间的关系？
1.短接记录仪，记录笔应回到机械零位，否则调之；
2.接通检测器，检测器中充满1mg/ml 的蛋白质溶液（如albumin），调节检测器的信号输出（通常是用电压标识 mv），使记录笔接近100％满刻度；
3.检测器中充满缓冲液，看记录笔的位置，最好接近～10％刻度的地方，这样防止出现吸光度值低于缓冲液无法记录的情况；如果笔位太高，应增大检测器信号输出，重新按步骤2 调节；反之降低信号输出；有的记录仪也可调节输入信号的范围，这样子就更方便了。满刻度的调节要视具体应用，不一定是1mg/ml 的蛋白浓度。
9、about dimension of column:（davidzrock）
“the choice of inner diameter may be based on the desired sample load or on considerations of the extra dispersion
effects from the wall region,which extends 20 particle diameters away from the wall....the length of the column is primarily chosen according to the resolution that is required.”
“the dimensions may be chosen according to the application at hand, but most laboratory columns have a 4-to 16-mm inner diameter(i.d.)and a length of 25 to 70 cm.”
-----from „protein purification principles,high resolution methods,and applications‟ 2ed edited by and
“the resolution of two separated zones in gel filtration increases as the sequare root of column columns should,therefore,be used to obtain the best resolution in analytical heights of greater than 1m are seldom a very long bed is judged to be necessary ,the effective bed height can often be increased simply by recycling or by using columns coupled in series.”
从amersham商品化提供的预装柱能看到，没有超过1m的。很长的柱子装填难度极大。装得好的柱子一根可以当两根用。
关于手工装柱，取决于装柱操作者的经验，完全可以比预装柱的效果好，而且可以根据试验的具体情况改变柱子参数。但预装柱的优点是方便、省事，很适合对柱子和填料进行“scaning”。另外工业化的层析要求是重复性，“对人是不信任的”，而不要求最好的效果，只要满足要求即可。这时就要有装柱设备（packingstation）了。现应用于工业生产的凝胶层析柱直径已超过1m。
10、在室温下的柱子，怎么保证其胶不发霉
1.柱子装填和使用过程中要注意减少微生物的污染，如对缓冲液和样品等进行澄清、除菌过滤。低温并不能保证无菌生长。
2.柱子在使用过程中，要定期进行在位清洗/消毒（sip/cip，sanitization/clean in place）。如1m naoh 处理1hr，可有效地减少微生物污染。具体使用哪种消毒剂以及消毒方法，请参阅凝胶及空柱使用说明书，避免损害凝胶柱。如你没有，我可帮你查。
3.柱子长期不用时，为防止微生物生长，建议在位保存。如用10mm naoh或20％乙醇将柱内的液体全部置换出来，存放在建议温度下（不一定是低温）。使用前再进行冲洗和平衡。也可将凝胶取出，保存于上述溶液中。
4.如有微生物生长，应进行灭菌处理，如1m naoh 或取出凝胶进行高温灭菌，具体方法亦需事先参阅说明书。
from amersham antimicrobial agents for chromatography
aqueous buffer solutions will often support growth of micro-organisms commonly found in it is difficult to clean columns that have become heavily contaminated with microorganisms, precautions should be taken to avoid growth in the column or in buffer use fresh buffer solutions and cover the buffer vessels to keep out dust, spores and other a column will not be used for more than a couple of days, it should be equilibrated with the bacteriostatic agent described in the manual supplied with the separation medium or prepacked recommend ethanol or sodium hydroxide for general agents are effective, inexpensive and do not cause disposal l 20% many chromatography media from amersham biosciences are supplied as a suspension containing 20% l, 20%, can also be used as an alternative to naoh for storing chromatography media under bacteriostatic
should not be used for columns packed with sephadex g-types and other media based on sephadex since the bed will shrink and spoil the hydroxide sodium hydroxide, 0.01 m, is an effective bacteriostatic higher concentrations(0.5-1.0 m)it is an
effective sanitizing agent for contaminated the most frequent contaminants in chromatographic systems, such as gram-negative bacteria, a good bactericidal effect is reached even at concentrations as low as 0.01 m ent with sodium hydroxide inactivates endotoxins(lps)and will, in many cases, solubilize substances precipitated on the low toxicity is an advantage that reduces the risk of sample hydroxide is not recommended for use with sepharose or for storage of sephacryl hr.11、层析关于装柱和使用，主要有几点要注意的：（davidzrock）
1、装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同；
2、填料要加水搅拌成均匀悬液，悬液浓度依填料而不同，一般70－85％，迅速倒入空柱内，或吸或压，流速和具体步骤看说明书。
3、这一点非常重要：装柱包括以后使用中绝对不允许柱内进入气泡（bubble free），柱头事先也要排除气泡。
4、选择合适的泵，首先是流速满足要求，脉冲尽量小。首选柱塞泵。
5、所有柱子尽量做到填料均匀，尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后，可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2－4 倍，在此范围内越小越好。
6、准备上柱的液体应进行过滤，至少是0.45micrometre。
7、至于测序，我想大概不到1mg 应该足够了。
8、关于纯化，首先要考虑的是你的目标：纯度、数量、速度、收率等等，再根据样品的具体情况，尤其是目标蛋白的性质，确定纯化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。第一步先从大量或复杂样品中将目标蛋白“抓出”，与主要杂质分离；再用高选择性的层析去除绝大部分杂质；最后精细纯化，提供纯度至设定目标。到实际工作中，不要死靠三步，也许一步也许四步或更多，具体情况具体分析。所谓“三步”只是一种思路而已。
