2023年蛋白质等电点实验结果讨论 蛋白质等电点的测定实验小结(三篇)

蛋白质等电点实验结果讨论 蛋白质等电点的测定实验小结篇二

/ 4

等电点聚焦测蛋白质等电点 1.了解蛋白质的两性解离性质和等电点聚焦的原理； 2.学习测定蛋白质等电点的方法并掌握圆盘电泳技术。

二.实验原理 等电点聚焦（ief）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，ief 实质 就是在稳定的 ph 梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。

在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的 结果，在两极之间逐步建立起稳定的 ph 梯度，当蛋白质分子或其它两性分子存 在于这样的 ph 梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最 终到达一个使其表面静电荷为 0 的区带，这时的 ph 则是这种分子的 pl。聚焦在 等电点的分子也会不断地扩散。一旦偏离其等电点后，由于 ph 环境的改变，分 子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向 pl 迁移。因此，这些分子总是处于不 断地扩散和抗扩散的平衡之中，在 pl 处得以“聚焦”。

三.实验步骤 1.凝胶制备 按表 1 的比例配制 4ml 工作胶液，在真空干燥器中抽气 10min。每组 4 管，每管 加胶液 1.8ml。混匀后立即注入到已准备好的凝胶管中，胶液加至离管顶部 1cm 处，在胶面上再覆盖 3mm 厚的水层，应注意不要让水破坏胶的表面，室温下放置 20〜30min 即可聚合。

表 1 凝胶工作液配比 凝胶母液（丙烯酰胺 30%甲叉双丙烯 酰胺 0.8%）

1ml 10%±硫酸铵 0.02ml 水 2.68ml 载体两性电解液 0.15ml 蛋白样品液 0.1ml,0.05ml temed 0.02ml 2.电泳 吸去凝胶柱表面上的水层，将凝胶管垂直固定于圆盘电泳槽中。于电泳槽下槽加 入0.2 %的 500ml 硫酸作正极；上槽加入 0.5 %的 800ml 乙醇胺作负极打开电源，/ 4

将电压恒定为 300v,因为聚焦过程是电阻不断加大的过程，故聚焦电泳过程中，电流将不断下降，降至稳定时，即表明聚焦已完成，继续电泳约 30min 后，停止 电泳，全程约需 3h。

3.剥胶 电泳结束后，取下凝胶管，用水洗去胶管两端的电极液，按照柱状电泳剥胶的方 法取出胶条，以胶条的正极为“头”，负极为“尾”，正极端呈酸性，负极端呈碱 性。剥离后，量出并记录凝胶的长度。

4.固定 取其中的凝胶条 3 根置于一个小培养皿内，倒入 10%放在三氯乙酸固定液中固定，约半小时后，即可看到胶条内蛋白质的白色沉淀带。

固定完毕，倒出固定液用直 尺量出胶条长度 l i 和正极端到蛋白质白色沉淀带中心，即聚焦部位的长度 l 2 o 梯度的测量 切段法：将未经固定的 1 根胶条，按照从正极端（酸性端）到负极端（碱性端）的顺 序切成相等的 10 段，按次放人有标号的、装有 0.0im 氯化钾的试管中，浸泡过 夜。然后用 ph 计测出每管浸泡液的 ph 并记录。

四•实验结果 1.凝胶条的长度及染色蛋白带的位置 凝胶条编号 1 2 3 4 固定前的长度 7.8cm 7.8cm 7.4cm 7.7cm l o

固定后的长度 7.7cm 7.8cm 7.4cm 未染色，测 ph l 1

梯度 蛋白带距酸端 1.3cm 1.4cm 1.3cm

距离 l 2

蛋白质距正极 1.32cm 1.4cm 1.3cm

实际长度 l s

梯度表及其相应标准曲线 标号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 长度 /cm 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 ph 值 3.05 3.72 5.04 6.76 7.24 7.99 8.62 9.58 10.1 4 10.1 8 / 4

蛋白质样品等电点的计算：

蛋白质聚焦部位距凝胶条正极端的实际长度 =固定后的蛋白区带中心距凝胶条正 极端的距离*固定前凝胶条长度/固定后凝胶条长度 则将上述数据代入 l f l 2 *

-l o，求出蛋白质距正极实际长度 l s 分别为 1.3cm、1.4cm、l i

1.3cm o 由凝胶条 1、2 和 3 及其相应蛋白带距离可计算出蛋白带距酸端的平均距 离：(1.3+1.4+1.32)/3=1.34 ②计算出蛋白质聚焦部位距凝胶条正极端的实际长度后，直接从 ph 梯度曲线上 求出该蛋白质等电点。

得出其标准公式为：y = 0.8372x + 2.6273 则待测蛋白质的等电点为 0.8372*1.34+2.6273=3.75 五•实验分析及讨论(1)实验结果测得的样品蛋白的等电点为 3.75，通过查常见蛋白质等电点参 考值表格可知，其为 b-卵黄脂磷蛋白。由于记录凝胶长度及蛋白质距正极的距 离存在读数误差，所以也可能是伴花生球蛋白(3.7-5.0)o(2)

等电点聚焦测蛋白质等电点分辨率高，可将等电点相差 0.01 — 0.02ph 单位 的蛋白质分开。不像一般电泳易受扩散作用影响，使区带越走越宽；聚焦电泳则 能抵消扩散作用，使区带越走越窄。同时，很稀的样品也可以聚焦而浓缩，实验 操作起来也简单方便。

(3)其存在其不足之处是在实验操作过程当中，读数的取值、样品溶液是否含 盐、在等电点时蛋白质是否溶解或变性，都会影响实验结果。因为盐会增大电流 量，产生热量；盐分子移至两极时，将产生酸或碱，中和两性电解质。由于这些 影响因素的存在，个人认为利用这一种方法还不足以鉴定出蛋白质种类。/ 4

附 常见蛋白质等电点参考值

第电点 实 m 质 sffe

xs 神召 w 兰[izhlprido 12.1 血 虹星自百人）[l beoo

£ lo^lia£a 2in}] 7.33 旦 v 空爱白 ojbuhiuzl]| 4.t-4.5 血上总自三码：[hequigm7ui{h£ii>] tf.92 髀科壬■自[ fiw i im ] l|.7]l 血雄:e m t 月：■岫町] 415—6 4 怔 k ia.査 & [lh）m£>lual：qide] 10.8 白 荃更出[tgjemtaiei] 呉蚩三（a3 [glcbinfhunam.}] 7.5 塩揚血£ 壬 e[cwh^croorui] 4.3-4? 护爸氏台[ch ilbllill] + 71； 4j9 出■舉巽宜（chlnzxmmizi] 4.6—sj 程:壬壬丰[coqal bwim] 0 齐 7 1 无眷惟工 sx 虽=「町曲 xnmnfiijl s“ a-ic*i ?!縄芝台[myonl bmninj 3.5 细.髦 邑 求 c[crfilk±t

戟蜒 6 [mo 日哪创 }2 审-至 卷 菱岂[卩-lactoglabulmj 5.1-5j-麻佥尋氛 iftst ；±jeinbniiib-1iii] 5.5 护 31 王 m[erv™】fi-3 0 a l-i^ ssto l-upopr^einj 3-4 y 1—球走官〔人,[yr 1-gla fem l ie

”kanaanj ] 5.b.6.6-7j-s.2 [1「.财罢窪[p 1-teeprnliiii] 5.9 ¥ 1~~ •霁自 t 扎、w

immu.}] 5.2-5 5 r ■卵寡屠艮壬-lip^ijeebiin] 3l7s atmyoiina] 5.1 晃育弟左応勇[tamq: y*uow 5.3

5* 牛 環鶏 埠[冒託 3ifi ^inu] 诧 r w 匿色[・iii 肝呼 hiln] 34-3-5 it 省漱去[i cmzi w 哼正] 5.73 民埒査兰[13 讪 1] 5.5-ib

3j5 二产蛋= s

[fijhnc■口驴日] 4.q.抚禹国[izuulze.] 1.0 匕 ■戛耳出査自宙-mi-mallin] fi.a 耳圧白[pt pun] s.l 卍-最益 r 崖自[0-cq-ltajlki] 5.1 je 罢 e 昌 摇城范罢三旬 whynao 切了蜩] 4.g 起空耳罡白[ah£1 闻 3.9 半土绻 勺更巴[twlune htch

ilbonm] 7.8 亘:龙■却 盟白[w&anichs] 3.7-5 q 帘丹檸 be•斑 c 二揍 7 [nbmuchasa rui^ttorifi-e puicreai）] 45s 梅匿变凳[keihmna]

甲 fs.鼻球匿官[ifeii 1 d

ejobulm] 4 岳巴兰霽曰 lk«tstem] e s-43 ¥ ■粘蛋当[¥-cwn] 1s3—441 验亘匿％ [“血呈凹]-fi.b-5_2 口-卵清植虽宣[

1-fg ¥ b [a lhsq mzit] 6m'蛋白质等电点实验结果讨论 蛋白质等电点的测定实验小结篇三

水、电、办公用品管理制度

为规范公司水、电、办公用品的使用，确保办公所需，倡导勤俭节约、物尽其用、杜绝铺张浪费、大手大脚，管好用好办公物品，特制定本制度。

一、节约用水

1、自然用水将龙头尽量开小，用完随手关闭，坚决避免“长流水”现象发生。

2、饮用水量身倒水，杜绝“剩半杯”现象，给顾客倒水以六七分为宜，喝完再续。饮水机一经发现漏水等损坏情况立即保修。

二、节约用电

1、强化照明系统节电。办公时间要充分利用自然光照，在阳光充足、室内光线好的情况下不开灯，长时间离开办公室或下班时要做到人走灯灭。

2、注重用电设备节电。各部门人员使用电脑、传真机、复印机等办公自动化设备时，尽量减少开启和使用次数，长时间不使用或下班后要彻底切断电源，减少办公设备待机能耗。

3、办公室、会议室等办公区域做到无人时不开空调，开空调时不开门窗。

三、节约办公用品（规定中的办公用品分为固定资产和一般办公用品）

1、固定资产主要指：桌椅、公文柜、电脑、电话机、打印机、饮水机、车辆等。

2、一般办公用品包括剪刀、胶带、橡皮擦、回形针、直尺、订书器、涂改液、裁纸刀、笔、信笺、笔记本、打印纸、复印纸、复写纸、印泥、钉书针、大头针、夹子、名片、账册、卷宗、档案袋（盒）、标签、纸杯、计算器、电池等。

3、节约用纸。公司鼓励员工尽量双面打印纸张，一面留白废纸应作草稿使用。

4、公司员工请自带饮水杯具，一般情况下禁止使用一次性纸杯。

5、尽量减少电话的通话时间，尽量长话短说；禁止私人电话与办公电话捆绑；禁止在办公场所用办公电话聊天。

6、节约办公用品。保管和使用好自己的办公用品，申领有度。对办公电器要注意保管和维修，长时间不用应切断电源，降低折旧。

7、办公用品应为办公所用，不得据为己有，不得移作他用或私用。

8、所有员工要勤俭节约，杜绝浪费，不许将办公用品随意丢弃废置，努力降低消耗和办公费用，精心使用办公设备。